液氮罐超低温保存方法概述

　　微生物可以低温储存，低温储存方法在应用领域有广泛的微生物储存方法。营养混乱的微生物种，如其他储存方法不能坚持其活力(如植物病原细菌)，一般可以低温储存(ATCC1983);Halliday，Baker1985)。

　　这种方法是以较慢的冷冻速度(1℃/分钟)冷藏小管或安瓿中的细胞，直到-150℃，然后将这些小管保存在-150℃～-在196℃的液氮中。低温冷冻保护剂不同于冻干法中使用的冷冻剂。甘油(10%)是一种常见的ATCC、由二甲亚砜(5%)和培养液制成的混合物储存在大多数细胞株中。

　　这种化学物质进入细胞可以防止内膜的冷藏损伤。保存在低温容器中的细胞在恢复时必须小心操作。当小管被加热时，霜冻会杀死细胞，适当的操作可以防止这种事故。只要灵巧地冷冻和清洁试验产品，就可以减少活力的丢失。方法是将密封的小管灵巧地放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然后打开支管，将内容物转移到培养液中。低温储存的微生物必须始终保存在非常低的温度环境中，因此需要液氮罐。在长期储存的过程中，必须经常注意填充液氮。

　　这种储存方法比冻干法需要更多的资金，包括保持储存温度所需的劳动力和液氮。

　　病毒低温储存所需材料有：热收缩塑料管(NuncCryoflex)，液氮罐、防割手套和面具、记号笔、汽体喷灯、液氮保温瓶。

　　2方法

　　(1)切一段两侧各超过冷冻管长度2cm的热收缩塑料管。干式液氮罐

　　(2)冰浴几分钟(分配培养的上清培养液，或分配培养液中的细胞溶解物)，用杀菌移液管将0.2ml冰浴的上清悬液分配到冷冻管中，拧紧外盖。

　　(3)将病毒冷冻管放入热收缩塑料管中间，刺入适当的标签。

　　(4)用喷灯小心加热热收缩塑料管，并将其包裹在冷冻管中。切记不要用过高的温度加热热收缩塑料管。

　　(5)小心加热热缩塑料管两侧，用大镊子夹住管端口，直至完全密封。

　　(6)将密封好的冷冻管迅速冷藏在配有液氮的保温瓶中(操作时需要戴口罩和手套)。

　　(7)将冷藏的冷冻管放入液氮罐的方格中，记录样品的具体储存方向、实验序列号和储存日期。

　　(8)需要时间，灵巧地从液氮罐中取下试品，放入37℃水浴箱冷冻后，用解剖刀头将热收缩塑料管切割在冷冻管的硅化垫圈处。拧开冷冻管外盖时，不要求去除热收缩塑料管。