液氮罐超低温保存方法概述

时间:2023-08-11 11:45来源: 作者:ydgmve2020yyx 点击:
微生物可以低温储存,低温储存方法在应用领域有广泛的微生物储存方法。营养混乱的微生物种,如其他储存方法不能坚持其活力(如植物病原细菌),一般可以低温储存(ATCC1983);Halliday,

  微生物可以低温储存,低温储存方法在应用领域有广泛的微生物储存方法。营养混乱的微生物种,如其他储存方法不能坚持其活力(如植物病原细菌),一般可以低温储存(ATCC1983);Halliday,Baker1985)。

  这种方法是以较慢的冷冻速度(1℃/分钟)冷藏小管或安瓿中的细胞,直到-150℃,然后将这些小管保存在-150℃~-在196℃的液氮中。低温冷冻保护剂不同于冻干法中使用的冷冻剂。甘油(10%)是一种常见的ATCC、由二甲亚砜(5%)和培养液制成的混合物储存在大多数细胞株中。

  这种化学物质进入细胞可以防止内膜的冷藏损伤。保存在低温容器中的细胞在恢复时必须小心操作。当小管被加热时,霜冻会杀死细胞,适当的操作可以防止这种事故。只要灵巧地冷冻和清洁试验产品,就可以减少活力的丢失。方法是将密封的小管灵巧地放入37℃的水中,直到所有的冰都溶解,然后打开支管,将内容物转移到培养液中。低温储存的微生物必须始终保存在非常低的温度环境中,因此需要液氮罐。在长期储存的过程中,必须经常注意填充液氮。

  这种储存方法比冻干法需要更多的资金,包括保持储存温度所需的劳动力和液氮。

  病毒低温储存所需材料有:热收缩塑料管(NuncCryoflex),液氮罐、防割手套和面具、记号笔、汽体喷灯、液氮保温瓶。

  2方法

  (1)切一段两侧各超过冷冻管长度2cm的热收缩塑料管。干式液氮罐

  (2)冰浴几分钟(分配培养的上清培养液,或分配培养液中的细胞溶解物),用杀菌移液管将0.2ml冰浴的上清悬液分配到冷冻管中,拧紧外盖。

  (3)将病毒冷冻管放入热收缩塑料管中间,刺入适当的标签。

  (4)用喷灯小心加热热收缩塑料管,并将其包裹在冷冻管中。切记不要用过高的温度加热热收缩塑料管。

  (5)小心加热热缩塑料管两侧,用大镊子夹住管端口,直至完全密封。

  (6)将密封好的冷冻管迅速冷藏在配有液氮的保温瓶中(操作时需要戴口罩和手套)。

  (7)将冷藏的冷冻管放入液氮罐的方格中,记录样品的具体储存方向、实验序列号和储存日期。

  (8)需要时间,灵巧地从液氮罐中取下试品,放入37℃水浴箱冷冻后,用解剖刀头将热收缩塑料管切割在冷冻管的硅化垫圈处。拧开冷冻管外盖时,不要求去除热收缩塑料管。

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